Сестринский пост в отделении гепатологии на 8-м этаже клиники. До ежедневнего утреннего брифинга в 8:45 с руководителем эксперимента успеваю ознакомиться с расписанием отделения на сегодня – планируется одна операция, радиочастотная аблация опухолевого очага в печени и обход пациентов. Отдельной сестринской комнаты в отделении, общепринятой в клиниках на постсоветском пространстве тут нет, им просто некогда сидеть. Каждые 8 часов сестры сменяют друг друга, днем их разумеется больше

Еженедельный брифинг в кабинете генерального директора Клинического Исследовательского Центра NMC, профессор Ishibashi (в центре), который контролирует проведение всех научных работ в стенах клиники. Тема брифинга – ход моего научного эксперимента, обсуждение достигнутых результатов и дальнейших шагов. Доктор Migita (слева), руководитель эксперимента, с которым я обсуждаю все рабочие моменты, дает ценные практические указания. После первой недели работы в центре я приучился воспринимать эти встречи очень серьезно, время у всех расписано до минут, поэтому еженедельные брифинги – практически единственная возможность обсудить важные вопросы одновременно с обоими моими руководителями

Известно, что каждый человек реагирует по-разному на один и тот же вирус гепатита В – одни излечиваются самостоятельно благодаря своей иммунной системе и даже не замечают этого, у других развивается хронический гепатит В с длительным благоприятным течением, который практически никак не мешает жить, у третьих заболевание в короткие сроки активно прогрессирует до цирроза печени и рака печени. Цель нашего научного эксперимента – попытка идентификации в ДНК генетических факторов, способствующих восприимчивости человека к вирусу гепатита В. Моя миссия – выделение нужного участка ДНК из крови пациентов с гепатитом В, кодирующего восприимчивость к вирусу и тестирование его на наличие возможных изменений, которые могут обусловить степень восприимчивости к одному и тому же вирусу разных людей

Залог успеха эксперимента – усидчивость и аккуратность. Реакции проводятся с объемами материала, измерямым в микролитрах, т.е. 1/1000 грамма

Задание амплификатору программы проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР). ПЦР позволяет копировать и практически бесконечно наращивать объем нужного для исследования фрагмента ДНК. В ходе реакции ДНК в пробирках в амплификаторе периодически нагревается и охлаждается, что позволяет разбивать двухцепочечную структуру, выделять нужный фрагмент и воспроизводить его до достижения нужного объема материала

Программа проведения ПЦР задана, пробирки загружены в предварительно нагретый до нужной температуры амплификатор, можно запускать аппарат. Примерно через 2 часа продукт реакции будет готов и можно начинать второй этап

Выполнение второго этапа эксперимента – рестриктного анализа, для меня ново. Один из ассистентов доктора Migitaс многолетним опытом лабораторной работы помогает избежать феномена “первого блина”

Конечный продукт, полученный в результате ПЦР и рестриктного анализа, подвергается электрофорезу, будучи погружен в специальный гель. Во время электрофореза, который был кстати впервые описан в стенах МГУ, фрагменты ДНК перемещаются в геле в зависимости от молекулярной массы благодаря создаваемому электрическому полю

Последний и самый волнующий этап – цифровая обработка агарозного геля с конечным продуктом в люминесцентном анализаторе изображения и проверка результатов. Минуты, необходимые для выдачи результата по эмоциальной нагрузке сравнимы с несколькими часами предварительной кропотливой лабораторной работы

В 3-х образцах (выделены стрелкой) выявлены изменения в молекуле ДНК. После обработки всех образцов ДНК пациентов с гепатитом В, а их несколько сотен, будет проведен конечный анализ полученных результатов и на основании сравнения с аналогичными данными от здоровых людей, подведены конечные итоги. Данное исследование в перспективе может пролить свет на закономерности восприимчивости людей к вирусу гепатита В и тяжести течения заболевания на генетическом уровне